病毒突变导致核酸检测失败？肛门拭子没用吗
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1月8日，美国食品和药物管理局(FDA)发布警告称，新冠变异病毒可能会对目前授权的核酸检测试剂盒产生影响，造成假阴性结果.
https://www . FDA . gov/medical-devices/letters-health-care-providers/generic-variants-SARS-cov-2-may-lead-false-negative-results-molecular-tests-detection-SARS-cov-2
随着我国多点疫情的爆发，这种影响越来越值得关注。上个月，中国首次在大连、沈阳等地发现了“超级传播者”，随后在北京顺义区宣布了“聚集性疫情”。然后山东河北吉林传来警报，部分地区报道有与英国变异株B.1.1.7和俄罗斯株B.1.1.123同源性较高的感染者
中国新确诊的COVID-19病例，百度疫情实时大数据报告(截至2.3)
很多地方关于疫情的新闻报道都指出，很多确诊病例多次核酸检测呈阴性。1月14日，石家庄市新确诊的84例COVID-19肺炎病例中，有56例经核酸检测为阴性后转为阳性。今年1月初，在大连COVID-19防控肺炎新闻发布会上，相关负责人介绍，部分病例经11次核酸检测呈阳性。
梅斯此前曾报道，COVID-19中核酸检测的假阴性率可达20%(COVID-19中核酸检测的假阴性率可达20%，获得“及格”的人不应放松警惕)，因为在实践中，患者病毒载量存在差异、试剂盒灵敏度不足、工作人员操作规范欠缺等因素都会影响到核酸检测结果和病毒变异造成的核酸检测失败也会涉及其中。
目前，SARS-CoV-2核酸检测试剂盒大多采用荧光定量PCR。检测原理是以病毒独特的基因序列为检测目标，通过PCR扩增，选定的目标DNA序列会呈指数级增长。每个扩增的DNA序列可以与我们预先添加的荧光标记探针结合，产生荧光信号。扩增的靶基因越多，积累的荧光信号越强。那么，核酸检测，其实就是通过检测荧光信号的累积来确定样本中是否有病毒核酸.
美国微生物学会SARS-CoV-2中聚合酶链反应检测流程图
当病毒发生变异时，如果变异恰恰发生在与检测试剂引物或探针结合的区域，那么检测就可能会失效.
上述美国食品和药物管理局报告显示，SARS-CoV-2突变可能会影响目前批准的3种试剂盒检测结果：
LMesaBiotech Accula检测试剂盒。根据制造商梅萨生物技术公司提供的信息和美国食品和药物管理局的分析，Accula试剂盒在当病毒基因变异位于28881位置（GGGAAC，如俄国B.1.1.123毒株）时的性能可能会受到影响。
LTaqPath组合套件。制造商是赛默飞舍科学有限公司。临床实验室的许多报告显示，试剂盒的三个目标之一将受到一些突变的影响
响，包括英国B.1.1.7变体，导致灵敏度显著降低。lLinea检测试剂盒。制造商为Applied DNA Sciences, Inc.。FDA指出，该试剂盒作用的两个靶点中，有一个靶点受某些突变影响，同样包括B.1.1.7变体。
考虑到近期国内出现的英国B.1.1.7和俄国B.1.1.123变体，上述这些结果为核酸检测假阴性率过高提供了合理解释。
我们都知道，国内近日针对假阴性频发现象采取了肛拭子检测措施，引发全国热议，那么在变异病毒面前，这是否属于“无用功”？
鉴于核酸检测试剂盒是为检测多个基因靶点而设计的，因此面对不同的变体时，其整体检测灵敏度受到什么程度的影响尚需探讨。但我们需要警惕这一结果的出现。而当试剂盒仍旧对变异病毒有效时，采取肛拭子检测可以为避免漏诊“拉上双保险”。
早在2020年4月21日，来自浙江大学附属第一医院的研究团队便在《英国医学杂志》（BMJ）上发表了题为“Viral load dynamics and disease severity in patients infected with SARS-CoV-2 in Zhejiang province, China, January-March 2020: retrospective cohort study”的文章，指出粪便中病毒的持续时间比在呼吸道和血清样本中的都要长得多，且粪便中病毒载量峰值出现得更晚。
研究者通过对比新冠患者体内不同组织样本的病毒存在时间、载量后发现，确诊患者粪便中病毒的持续时间（22天，四分位数范围为17-31天）显著长于呼吸系统（18天，13-29天；P=0.02）和血清样本（16天，11-21天；P
按样品类型和疾病严重程度比较病毒载量。彩色条表示中位数，黑色条表示四分位间距，https://doi.org/10.1136/bmj.m1443
另外研究还发现，确诊患者呼吸道样本中病毒的检出率从症状发作第一周的95％逐渐降低到第四周的54％，随后的呼吸道样本呈阴性；而粪便和血清样本的阳性率却从第一周开始逐渐增加，随后从第三周才开始减少。
轻度和重度症状患者的呼吸道样本和粪便样本中症状发作以来的病毒载量变化
https://doi.org/10.1136/bmj.m1443
这一研究结果凸显了采用粪便样本预防和控制新冠的重要性，也为如今采用的肛拭子检测提供了有力依据。
事实上，西班牙消化病理学会曾在2020年3月18日针对大流行期间胃肠内镜和胃肠病学单位的运作提出的一般建议时提出“通过粪便清除病毒的时间可能比在呼吸道分泌物中发现病毒的时间更长”的猜测。
DOI: 10.17235/reed.2020.7052/2020
随着今年初中国采用肛拭子检测后，西班牙《ABC》新闻网也在最新的报道中表示：肛拭子是一种有效的检测方法，将对防止新冠病毒的扩散有明显帮助。
2020年4月16日-10月12日入境中国人员新冠无症状感染者比例越来越高
Asymptomatic SARS-CoV-2 Infections Among Persons Entering China From April 16 to October 12, 2020.doi:10.1001/jama.2020.23942.
所以，无论带来挑战的因素是病毒变异还是无症状患者的增加，不准确的诊断测试注定会破坏遏制新冠疫情的努力。因此我们需要对测试的准确性进行审查，以便更好地解释测试结果及其在流行病中的影响。而对于普通大众来说，采取“在核酸检测前两小时不应进食，采样前半小时尽量不要抽烟、喝酒、嚼口香糖”等措施，也可以为提高检测成功率带来积极影响。
来源：梅斯医学
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